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ChIP-qPCR 染色质免疫沉淀定量 PCR
ChIP-qPCR是体内 DNA - 蛋白互作金标准技术,真实反映生理状态下,转录因子、组蛋白修饰在染色质上的原位结合,是表观遗传、转录调控机制研究的核心实验。
甲醛常温交联细胞,固定体内蛋白 - DNA 天然结合复合物;超声破碎染色质为随机片段,利用特异性抗体富集与目的蛋白结合的 DNA 片段,解交联纯化 DNA 后,通过 qPCR 或者高弹力测序,判断蛋白与染色质的结合。
甲醛常温交联细胞,固定体内蛋白 - DNA 天然结合复合物;超声破碎染色质为随机片段,利用特异性抗体富集与目的蛋白结合的 DNA 片段,解交联纯化 DNA 后,通过 qPCR 或者高弹力测序,判断蛋白与染色质的结合。
详情介绍
实验简图
实验流程
1.活细胞甲醛交联,终止反应后收集细胞;
2.超声破碎染色质,片段化至 200-500bp;
3.特异性抗体富集蛋白结合的染色质片段,设置 IgG 阴性对照;
4.解交联、纯化 DNA 片段;
5.靶标位点引物 qPCR 定量或者高通量测序。
实验周期
ChIP-qPCR:14-20 个工作日
ChIP-seq:25-35 个工作日
需提供样品信息
1.新鲜培养细胞、冻存组织样本;
2.ChIP 级特异性抗体(可委托代购);
3.靶基因结合位点序列、引物信息。
应用场景
1.体内转录因子染色质结合位点验证;
2.组蛋白修饰、表观修饰位点定量检测;
3.增强子 - 启动子结合调控验证。
公司环境
仪器设备
实验室


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