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双荧光素酶报告基因实验
双荧光素酶报告基因实验是转录调控、miRNA 靶标验证的核心定量技术，灵敏度高、重复性好、操作简便，是基因表达调控机制研究的必备实验。
以萤火虫荧光素酶为报告基因，将待测启动子、3'UTR 序列构建至报告载体；转录因子结合启动子会激活报告基因表达（发光升高），miRNA 结合 3'UTR 会抑制翻译（发光降低）；以海肾荧光素酶为内参归一化，消除系统误差，定量检测转录调控、靶向结合效率。
以萤火虫荧光素酶为报告基因，将待测启动子、3'UTR 序列构建至报告载体；转录因子结合启动子会激活报告基因表达（发光升高），miRNA 结合 3'UTR 会抑制翻译（发光降低）；以海肾荧光素酶为内参归一化，消除系统误差，定量检测转录调控、靶向结合效率。
详情介绍
实验简图
实验流程
1.构建启动子 / 3'UTR 野生型、突变型报告载体；
2.报告载体与转录因子 /miRNA mimics 共转染细胞；
3.培养 48h 后裂解细胞，依次检测萤火虫、海肾荧光素酶活性；
4.内参归一化，计算相对报告基因活性，判断调控关系。
实验周期
双荧光素酶报告基因实验：10-14 个工作日
需提供样品信息
1.靶基因启动子 / 3'UTR 序列、miRNA / 转录因子序列；
2.待测细胞系、转染相关要求。
应用场景
1.转录因子 - 启动子结合调控验证、启动子活性分析；
2.miRNA 靶基因 3'UTR 结合验证、ceRNA 机制验证；
3.药物对基因转录调控的影响检测。
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