19912401840
Technical service category
技术服务类别
GST PullDown 体外蛋白互作验证
GST PullDown是体外蛋白 - 蛋白直接互作验证的金标准技术，可明确区分直接互作与间接互作，常与 Co-IP 互补使用，完美解决 Co-IP 无法判断互作类型的痛点，同时可用于互作结构域的定位截短验证。
将诱饵蛋白与 GST 标签融合表达，利用 GSH 标记磁珠特异性结合 GST 标签，固定诱饵蛋白；与猎物蛋白（总蛋白裂解液 / 纯化重组蛋白）孵育后，捕获与诱饵蛋白直接结合的猎物蛋白，经洗涤洗脱后通过 WB 鉴定，是体外直接互作的核心验证方法。
将诱饵蛋白与 GST 标签融合表达，利用 GSH 标记磁珠特异性结合 GST 标签，固定诱饵蛋白；与猎物蛋白（总蛋白裂解液 / 纯化重组蛋白）孵育后，捕获与诱饵蛋白直接结合的猎物蛋白，经洗涤洗脱后通过 WB 鉴定，是体外直接互作的核心验证方法。
详情介绍
实验简图
实验流程
1.构建 GST - 诱饵融合表达载体，原核诱导表达并纯化可溶性蛋白；
2.纯化蛋白与 GSH 磁珠结合，封闭磁珠非特异性位点；
3.与猎物蛋白、细胞总蛋白孵育，完成体外结合反应；
4.严格洗涤去除游离蛋白与非特异吸附蛋白；
5.洗脱结合蛋白，Western Blot 验证互作结果。
实验周期
GST PullDown+wb验证：14-20 个工作日
GST PullDown+ms验证：25-30个工作日
需提供样品信息
1.诱饵蛋白、猎物蛋白 CDS 序列及 NCBI 登录号；
2.构建好的原核表达载体，或委托公司构建载体；
3.含猎物蛋白的细胞裂解液 / 纯化蛋白。
应用场景
1.体外蛋白 - 蛋白直接互作验证；
2.蛋白互作关键结构域、结合位点截短验证；
3.排除体内间接互作干扰，机制研究补充验证。
公司环境
仪器设备
实验室
首页
技术服务
产品中心
咨询报价