19912401840
Technical service category
技术服务类别
酵母双杂交 Y2H
酵母双杂交是经典的体内蛋白互作高通量筛选技术，可在酵母细胞内模拟互作环境，既能验证已知互作，也可通过 cDNA 文库大规模筛选未知互作蛋白，是发现新靶点、新互作关系的核心技术。
基于酵母转录因子 Gal4 的 DNA 结合结构域（BD）与转录激活结构域（AD）分离特性，诱饵蛋白与 BD 融合、猎物蛋白与 AD 融合；两个蛋白发生互作时，BD 与 AD 空间靠近，重构完整转录因子，激活酵母报告基因表达，酵母可在缺陷培养基上生长、显色，实现互作检测。
基于酵母转录因子 Gal4 的 DNA 结合结构域（BD）与转录激活结构域（AD）分离特性，诱饵蛋白与 BD 融合、猎物蛋白与 AD 融合；两个蛋白发生互作时，BD 与 AD 空间靠近，重构完整转录因子，激活酵母报告基因表达，酵母可在缺陷培养基上生长、显色，实现互作检测。
详情介绍
实验简图
实验流程
1.构建 BD - 诱饵载体，完成酵母自激活与毒性验证；
2.诱饵载体与 AD - 猎物载体 /cDNA 文库共转化酵母；
3.双缺陷、四缺陷培养基逐级筛选阳性克隆；
4.阳性克隆测序、回转验证，排除假阳性。
实验周期
文库构建：20-30个工作日
已知互作验证：20-25 个工作日
文库筛选：30-40 个工作日
需提供样品信息
1.诱饵蛋白 CDS 序列、NCBI 登录号；
2.待测猎物基因 / 商品化 cDNA 文库；
3.蛋白相关功能背景信息。
应用场景
1.已知蛋白 - 蛋白互作体内验证；
2.全基因组 cDNA 文库未知互作蛋白筛选；
3.互作关键结构域定位验证。
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