19912401840
Technical service category
技术服务类别
酵母单杂交 Y1H
酵母单杂交是DNA -蛋白互作高通量筛选技术，从已知 DNA 元件出发，高通量筛选 cDNA 文库中的结合转录因子，是转录调控机制研究的经典筛选方法。
将待测 DNA 顺式作用元件构建至报告基因上游，转化酵母构建报告菌株；将转录因子 cDNA 与 AD 结构域融合，转化报告菌株；转录因子结合 DNA 元件后，激活报告基因表达，酵母可在缺陷培养基上生长，实现 DNA - 蛋白互作检测。
将待测 DNA 顺式作用元件构建至报告基因上游，转化酵母构建报告菌株；将转录因子 cDNA 与 AD 结构域融合，转化报告菌株；转录因子结合 DNA 元件后，激活报告基因表达，酵母可在缺陷培养基上生长，实现 DNA - 蛋白互作检测。
详情介绍
实验简图
实验流程
1.构建 DNA 元件报告载体，转化酵母构建稳定报告菌株；
2.验证报告菌株自激活活性，确定筛选抗生素浓度；
3.AD - 转录因子载体 /cDNA 文库转化报告菌株；
4.缺陷培养基筛选阳性克隆，测序回转验证。
实验周期
文库构建：20-30个工作日
已知蛋白验证：20-25 个工作日
文库筛选：30-40 个工作日
需提供样品信息
1.待测 DNA 元件序列、转录因子基因信息；
2.商品化 cDNA 文库（文库筛选用）。
应用场景
1.转录因子 - DNA 元件结合验证；
2.全基因组 cDNA 文库筛选 DNA 结合蛋白；
3.转录调控网络构建。
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